***、 開機(jī)準(zhǔn)備：環(huán)境與耗材合規(guī)設(shè)置（耗時(shí)：<5分鐘）

運(yùn)行環(huán)境確認(rèn)：

設(shè)備放置于穩(wěn)定水平臺(tái)面 ，散熱口預(yù)留≥10cm空間 。

環(huán)境溫度：15–30℃ | 相對(duì)濕度：≤80% | 避免強(qiáng)電磁干擾源。

連接穩(wěn)壓不間斷電源（UPS） 防止電壓波動(dòng)中斷實(shí)驗(yàn)。

啟動(dòng)設(shè)備：

按下前面板電源鍵，等待系統(tǒng)自檢完成 （約1分鐘），觸摸屏顯示主菜單。

耗材選擇與裝載：

關(guān)鍵提示： 使用非認(rèn)證耗材可能導(dǎo)致密封失效、導(dǎo)熱不均，影響擴(kuò)增效率！ 

僅使用賽默飛認(rèn)證耗材 （如MicroAmp? 96孔反應(yīng)板、0.2mL單管）。

確認(rèn)反應(yīng)板/管與熱循環(huán)模塊凹槽匹配 （避免翹曲）。

輕柔平放 反應(yīng)板至模塊中心，確保無傾斜。

二、 程序創(chuàng)建與參數(shù)設(shè)置（耗時(shí)：2-3分鐘）

新建程序：

主菜單選擇 Protocol → Create New → 輸入程序名稱（如 SARS-CoV-2_Ngene）

設(shè)置溫度步驟（核心操作）：

步驟類型 溫度 持續(xù)時(shí)間 循環(huán)數(shù) 應(yīng)用場景

預(yù)變性 95℃ 3-5分鐘 1 模板DNA整體變性

變性 95℃ 30秒 35 雙鏈DNA解離

退火 55-65℃ 30秒 ↑ 引物特異性結(jié)合

延伸 72℃ 1分鐘/kb ↑ DNA聚合酶合成產(chǎn)物

終延伸 72℃ 5-10分鐘 1 補(bǔ)齊末端產(chǎn)物

保存 4-10℃ ∞ 1 產(chǎn)物短期存儲(chǔ)

退火溫度： 根據(jù)引物Tm值優(yōu)化（推薦賽默飛在線工具[Primer Design Tool ]）

延伸時(shí)間： 按擴(kuò)增片段長度計(jì)算（1kb=60秒）

熱蓋溫度設(shè)置（防蒸發(fā)關(guān)鍵）：

96孔板：High （高壓模式）

0.2mL單管：Low （低壓模式）

進(jìn)入 Lid Temperature 選項(xiàng)，設(shè)置為 105°C （推薦值）。

適用耗材類型：

三、 啟動(dòng)運(yùn)行與實(shí)時(shí)監(jiān)控（擴(kuò)增中操作）

啟動(dòng)程序：

裝載樣本后關(guān)閉熱蓋，點(diǎn)擊 Start → 確認(rèn)程序參數(shù) → 再次點(diǎn)擊 Start。

系統(tǒng)自動(dòng)檢測熱蓋壓力，屏幕顯示 "Run in Progress" 。

運(yùn)行監(jiān)控要點(diǎn)：

溫度追蹤： 實(shí)時(shí)顯示當(dāng)前模塊溫度、目標(biāo)溫度及剩余時(shí)間。

異常報(bào)警： 若出現(xiàn) "Lid Open" （熱蓋未關(guān)嚴(yán)）、"Over Temp" （超溫）告警，立即暫停檢查。

避免干擾： 運(yùn)行期間勿開啟熱蓋 ，防止溫度驟變影響擴(kuò)增。

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